細胞復(fù)蘇的原則-快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。
氣相液氮罐
一、 實驗前準備：
1、將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
二、取出凍存管：
1、根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2、從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。
三、迅速解凍：
1、迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。
2、約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。
四、平衡離心：
用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
五、制備細胞懸液：
1、吸棄上清液。
2、向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細胞懸液。
六、細胞計數(shù)：
細胞濃度以5×105/ml為宜。
七、培養(yǎng)細胞：
將復(fù)合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細胞情況而定。
初學者易犯錯誤：
1、水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
2、水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時間延長。
3、離心前忘記平衡，導(dǎo)致離心機損壞和細胞丟失。
氣相液氮罐
4、一次復(fù)蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細胞交叉污染。
